Go Back   Diễn đàn Sinh học Việt Nam > Phòng thí nghiệm > Làm thí nghiệm với acid nucleic

Làm thí nghiệm với acid nucleic Tách chiết, đo OD, điện di, cắt giới hạn, ligation, biến nạp, cloning, blotting...

Trả lời
 
Ðiều Chỉnh Xếp Bài
Old 08-11-13, 22:49   #71
Inuyasha
Thành viên
 
Inuyasha's Avatar
 
Tham gia ngày: Aug 2008
Bài gửi: 43
Thanks: 2
Thanked 13 Times in 9 Posts
mọi người cho mình hỏi tí,trong realtime-PCR,việc chỉnh lại đường standard (hệ số tuyến tính,hệ số sốc Slope...) trước mỗi lần là như thế nào? vì chị hướng dẫn mình nói mình tìm hiểu mà chị ấy nói cái này cần kinh nghiệm nên khó giải thích..
và ai đó có thể nói cho mình biết hiện giờ bộ kit PCR có các lọ dung dịch (plex 1-5) lần lượt là các chất gì ko?
Inuyasha is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 12-11-14, 09:45   #72
Hangmaihoa
Registered Users
 
Hangmaihoa's Avatar
 
Tham gia ngày: Nov 2014
Bài gửi: 1
Thanks: 0
Thanked 0 Times in 0 Posts
Thành viên mới xin chào mọi người ạ
Cho em hỏi là có bác nào xét nghiệm ADN hài cốt chưa ạ, cho em học hỏi kinh nghiệm với.
Em thấy cũng có vấn đề liên quan đến Realtime PCR nên em nghĩ đã cso tiền bối ứng dụng trong licnhx vực này, mong các tiền bối giúp đỡ .
Hangmaihoa is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 18-11-16, 12:05   #73
Nguyễn Thị Thuý Hằng
Registered Users
 
Nguyễn Thị Thuý Hằng's Avatar
 
Tham gia ngày: Nov 2016
Bài gửi: 1
Thanks: 1
Thanked 0 Times in 0 Posts
Dạ. Em mới làm PCR nhưng không chuyên về nó. Chỉ là được học qua người khác chỉ ( kiểu giống cầm tay chỉ việc đó ạ). Nhưng nghe nói PCR độc lắm nên rất lo lắng. Em làm cũng cố gắng cẩn thận. Nhưng vẫn không yên tâm (do tâm lý là con gái sợ sau này sinh con này nọ). Bên em hiện không sử dụng EtBr nữa mà dùng safeview của Canada ạ. Vậy Anh chị nào cho e lời khuyên về cách làm, những mối nguy hiểm về hoá chất, cách bảo hộ cho bản thân không ạ. Bên e dùng PCR chứ không dùng Realtime PCR nơi ạ. Mong được chia sẻ, em cám ơn nhiều ạ!!!
Nguyễn Thị Thuý Hằng is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 12-10-17, 10:51   #74
HANG AJ
Registered Users
 
HANG AJ's Avatar
 
Tham gia ngày: Oct 2017
Bài gửi: 1
Thanks: 0
Thanked 0 Times in 0 Posts
Trích:
Nguyên văn bởi Dương Văn Cường View Post
Threshold cycle (Ct) là một yếu tố quan trọng trong Real Time PCR. Định nghĩa của Ct là số chu kỳ mà tại đó tín hiệu huỳnh quang bắt đầu vượt qua (cross) giá trị threshold.

Vậy, cần hiểu threshold là cái gì :D

Real Time PCR được dùng để định lượng với 1 độ chính xác cực kỳ cao. Do đó, việc đo tín hiệu huỳnh quang (là giá trị đại diện của nồng độ DNA mạch kép trong phản ứng) phải được tiến hành thật chuẩn.

Để làm được điều này cần thiết phải có một hệ đệm được thiết kế để ổn định các điều kiện. Trong hệ đệm này (do nhà sản xuất cung cấp) có một chất làm đối chứng (Passive reference). Khi đo tín hiệu huỳnh quang của reporter, máy sẽ dựa trên tín hiệu của Passive reference. Giá trị thương số khi lấy Cường độ tín hiệu huỳnh quang reporter chia cho cường độ tín hiệu huỳnh quang Passive reference được ký hiệu là Rn.

Threshold được định nghĩa là độ lêch chuẩn trung bình của giá trị Rn trong các chu kỳ đầu của PCR.

Để hiểu đúng hoàn toàn cách tính toán, cách xử lý ... của Real time là rất khó. Nên hiểu theo quan điểm của nhà sinh học, với tư cách người sử dụng công nghệ.

Ý nghĩa của Threshold và Threshold cycle:

- Threshold là điểm bắt đầu của sự phát hiện tín hiệu huỳnh quang.
- Ổn định: Trong các chu kỳ đầu của phản ứng PCR, cường độ tín hiệu huỳnh quang thay đổi lên xuống thực chất chỉ là "nhiễu". Threshold cycle và Baseline phải được đặt sao cho máy Real Time "không thèm chấp" các tín hiệu nhiễu này.
- Xác định giá trị Ct sao cho đúng đồng nghĩa với việc tìm được điều kiện phù hợp nhất, đúng đắn nhất để đo cường độ huỳnh quang.
HANG AJ is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Trả lời

Ðiều Chỉnh
Xếp Bài

Chuyển đến


vB 3.8.7 Copyright © 2000 - 2017, Jelsoft Enterprises Ltd.