Go Back   Diễn đàn Sinh học Việt Nam > Phòng thí nghiệm > Làm thí nghiệm với acid nucleic

Làm thí nghiệm với acid nucleic Tách chiết, đo OD, điện di, cắt giới hạn, ligation, biến nạp, cloning, blotting...

 
Trả lời
 
Ðiều Chỉnh Xếp Bài
Old 02-05-17, 16:41   #1
machnha
Registered Users
 
machnha's Avatar
 
Tham gia ngày: May 2017
Đến từ: Thừa Thiên Huế
Bài gửi: 1
Thanks: 0
Thanked 0 Times in 0 Posts
Mình và bạn có chạy pcr 5 mẫu ( từ các loại cây khác nhau), sản phẩm lúc chạy 12µl thì mẫu ra sáng, cả 25 băng đều sáng rõ ( dõ mỗi mẫu mình xài 5 mồi)
Nhưng sau đó khi mình pcr tinh sạch thêm 2 lần nữa cùng một quy trình với thể tích 50µl và 25µl thì kết quá đều không có hiện băng nào.
vì mater mix mình xài là mater mix tự pha cho mỗi lần xài, lần pcr tinh sạch mình đã pha lại, và k cho kết quả,nên mình pha lại và thử thêm 2,3 lần nữa thì vẫn thấy có 1,2 băng hiện ra, dùng sản phẩm pcr cũ thì thấy băng sáng rõ bình thường. Do mình lặp đi lặp lại 3 lần, cùng 1 quy trình pcr, và dùng cả 5 mẫu, nên nói quy trình làm hay do thao tác của mình, mẫu đều không đúng.
Nhưng ống mater mix vẫn cho 1,2 băng hiện ra, dùng sản phẩm pcr cũ thì vẫn sáng. Ai có kinh nghiệm trong vấn đề này chia sẽ cho mình có thể do đâu được khộng a?
machnha is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn

Sponsored Links
Old 21-07-17, 11:09   #2
Mainguyen
Registered Users
 
Mainguyen's Avatar
 
Tham gia ngày: Jul 2017
Bài gửi: 3
Thanks: 0
Thanked 0 Times in 0 Posts
Trong trường hợp này thì bạn cần xét đến 3 vấn đề:
1. Thể tích mẫu PCR, bạn đã thử 50µl và 25µl nhưng bạn đã chạy lại thể tích 12µl như lần đầu bạn chạy chưa? Thể tích tổng số và thể tích DNA lúc chạy PCR rất quan trọng.
2. Phần lớn các kết quả PCR không như mong muốn đều do chất lượng mẫu DNA bạn dùng PCR không tốt hoặc không đồng nhất. Bạn cần kiểm tra quá trình tách chiết và thao tác tách chiết của mình, theo các anh/chị thường làm tách chiết thì tách chiết kit cho kết quả đồng nhất và chất lượng khá tốt tùy theo kit bạn chọn. Trước khi PCR bạn nên điện di để kiểm tra chất lượng mẫu DNA.
3. Một việc nữa, tuy nói là các quy trình bạn và bạn của bạn làm giống nhau 100% nhưng bạn có chắc chắn rằng cách bạn pha phản ứng, trình tự các bước chạy mẫu, loại hóa chất bạn dùng, các thiết bị liên quan bạn sử dụng,... giống nhau 100%. Bạn nên check lại nhé!
Mainguyen is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Trả lời

Ðiều Chỉnh
Xếp Bài

Chuyển đến

Similar Threads
Ðề tài Người gửi Chuyên mục Trả lời Bài mới gởi
Hỏi về sự khác nhau giữa cấu trúc và độ bền giữa nước biển,sông và nước cất? otcay.muoi Hóa sinh 4 14-09-11 20:49
Suy giảm miễn dịch và ức chế miễn dịch giống hay khác nhau? Uchiha.Itachi Miễn dịch 11 05-06-11 21:49
Cơ tim và cơ vân khác nhau thế nào? Nguyễn Hoàng Hiệp Công nghệ tế bào, mô, phôi 2 31-08-08 01:01
Sự khác nhau giữa hồng cầu người và hồng cầu gà. Nguyễn Ngọc Huy2 Động vật 4 03-05-07 00:52


vB 3.8.7 Copyright © 2000 - 2017, Jelsoft Enterprises Ltd.