Go Back   Diễn đàn Sinh học Việt Nam > Phòng thí nghiệm > Làm thí nghiệm với acid nucleic

Làm thí nghiệm với acid nucleic Tách chiết, đo OD, điện di, cắt giới hạn, ligation, biến nạp, cloning, blotting...

Trả lời
 
Ðiều Chỉnh Xếp Bài
Old 17-01-14, 17:15   #1
Miss Le
Registered Users
 
Miss Le's Avatar
 
Tham gia ngày: Oct 2010
Bài gửi: 8
Thanks: 2
Thanked 1 Time in 1 Post
Em đang thiết kế mồi để phân lập một gen gần 3,5 kb từ cDNA của thực vật ( Genomic sequence của gen gần 9 kb quá dài nên em phải dùng Transcript sequence)

Sau khi tìm kiếm thông tin về gen, em có trình tự Transcript sequence như trong file đính kèm. Do ko có vùng 5'UTR nên em bắt buộc phải dùng 18-22 Nu đầu tiên của trình tự để thiết kế mồi Forward, tuy nhiên mồi này có xu hướng tự bắt cặp hình thành dimer-primer rất cao. Và thực tế kết quả PcR chỉ cho băng dimer-primer này.

Em chưa biết phải giải quyết vấn đề ntn. Ai có kinh nghiệm trong việc này làm ơn giúp em với ạ

Em xin chân thành cảm ơn.
File Kèm Theo
File Type: doc Transcript seq.doc (25.0 KB, 28 lần tải)
Miss Le is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn

Sponsored Links
Old 20-01-14, 11:49   #2
Ho Huu Tho
Thành viên
 
Ho Huu Tho's Avatar
 
Tham gia ngày: Feb 2010
Đến từ: Helsinki, Finland
Bài gửi: 1,712
Thanks: 693
Thanked 555 Times in 384 Posts
Bạn có thể xem xét giải pháp sau: Thiết kế mồi forward ngắn lại và thêm một đoạn 5'-tail vào cho nó đủ dài như mồi bình thường. Ngoài ra bạn nên tiến hành tổng hợp cDNA bằng gene-specific primer để tăng độ đặc hiệu của phản ứng. Chúc bạn thành công!
Ho Huu Tho is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Thanked by
Old 27-02-14, 21:19   #3
Miss Le
Registered Users
Thread starter
 
Miss Le's Avatar
 
Tham gia ngày: Oct 2010
Bài gửi: 8
Thanks: 2
Thanked 1 Time in 1 Post
Trích:
Nguyên văn bởi Ho Huu Tho View Post
Bạn có thể xem xét giải pháp sau: Thiết kế mồi forward ngắn lại và thêm một đoạn 5'-tail vào cho nó đủ dài như mồi bình thường. Ngoài ra bạn nên tiến hành tổng hợp cDNA bằng gene-specific primer để tăng độ đặc hiệu của phản ứng. Chúc bạn thành công!
em cảm ơn anh nhiều. Dựa trên một số gợi ý của anh em đã giải quyết đc vấn đề rồi.
Miss Le is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Trả lời

Ðiều Chỉnh
Xếp Bài

Chuyển đến


vB 3.8.7 Copyright © 2000 - 2018, Jelsoft Enterprises Ltd.