Go Back   Diễn đàn Sinh học Việt Nam > Phòng thí nghiệm > Làm thí nghiệm với protein

 
Trả lời
 
Ðiều Chỉnh Xếp Bài
Old 03-01-05, 20:54   #1
Phạm Ngọc Dương
Registered Users
 
Phạm Ngọc Dương's Avatar
 
Tham gia ngày: Jan 2005
Đến từ: Vườn quốc gia Cát Tiên
Bài gửi: 128
Thanks: 0
Thanked 7 Times in 5 Posts
:P Tôi đang được giao nghiệm vụ tinh sạch một hỗn hợp Enzyme một cách hiệu quả và kinh tế nhất
hỗn hợp đó gồm có các enzyme sau
A :la loại enzyme có Pi=11 khối lưọng 20.000Da
B : pI= 4.5 khối lượng 60.000Da
C PI=4.5 360.000Da
D: pi=5 360.000Da và đặc hiệu Asp
Hiên nay tôi chưa biết nhiều về cách tinh sạch enzyme.Các bạn có thể giúp tôi đưa ra một mô hình tối ưu nhất nếu gặp trương hợp trên.Hay cung cấp cho tôi một số hiểu biết về các phương pháp tinh sạch enzyme như sắc kí lọc gel ,sắc kí ái lực,điên di,hoặc kết tủa ....Và phạm vi ứng dụng của nó trong sản xuất.
Phạm Ngọc Dương is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 04-01-05, 22:29   #2
shortgun
Registered Users
 
shortgun's Avatar
 
Tham gia ngày: Aug 2004
Đến từ: Lao
Bài gửi: 86
Thanks: 0
Thanked 0 Times in 0 Posts
Tớ có thể bàn luận với cậu về vấn đề này, kể cả ở quy mô công nghiệp, nhưng trước hết cậu hãy học lý thuyết đi đã :)
shortgun is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 05-01-05, 11:19   #3
Phạm Ngọc Dương
Registered Users
Thread starter
 
Phạm Ngọc Dương's Avatar
 
Tham gia ngày: Jan 2005
Đến từ: Vườn quốc gia Cát Tiên
Bài gửi: 128
Thanks: 0
Thanked 7 Times in 5 Posts
:P Tơ đa tìm hiểu về vấn dề này rồi đấy chứ,và tớ cũng đã được thực hiện một số phuơng pháp tách và tinh sạch enzyme như điện di ,săc kí ,dùng kêt tủa ..nhưng tớ mới chỉ thực hiện trong phòng thi ngiệm thôi .Tơ muấn biết về khả năng ứng dụng của nó trong công nghiệp và khi thực hiện trên quy mô lớn thì nó khác gì so vơi trong phòng thí nghiệm.
Phạm Ngọc Dương is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 06-01-05, 08:32   #4
Phạm Ngọc Dương
Registered Users
Thread starter
 
Phạm Ngọc Dương's Avatar
 
Tham gia ngày: Jan 2005
Đến từ: Vườn quốc gia Cát Tiên
Bài gửi: 128
Thanks: 0
Thanked 7 Times in 5 Posts
Tôi có thể tách hỗn hợp trên như sau được không
đầu tiên tôi dùng dung dịch muối trung tính có PH=4,5 để tách hai enzym B và C
sau đó tôi dùng sắc kí lọc gel để tách B ra khỏi C
dùng sắc kí ái lực với dăc hiệu Asp để tách A Và D ra khỏi nhau.
Vấn đề là tôi vẫn chưa hình dung ra được bằng cách nào để gắn dặc hiệu Asp vào cột gel ,tôi chưa được thực hiện phương pháp này bao giờ .
Và nếu thực hiện các phương pháp trên dể tách hỗn hợp enzym thi trong sản xuất người ta gắn kết các quá trình làm sao để quá trình tách thành một hệ thống. :P
Phạm Ngọc Dương is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 08-01-05, 13:30   #5
Nguyễn Ngọc Lương
Administrator
 
Nguyễn Ngọc Lương's Avatar
 
Tham gia ngày: Nov 2005
Đến từ: Đại học Huế
Bài gửi: 2,133
Thanks: 156
Thanked 706 Times in 418 Posts
nếu biết pI và khối lượng phân tử rồi thì chạy điện di 2 chiều là hợp lý nhất
không biết rõ về tinh sạch enzyme lắm nên tôi chỉ góp được có thế.
Xin hỏi enzyme tách chiết như trên thì còn gì hoạt tính nữa? Có lẽ cứ phải sắc ký ái lực, sắc ký lỏng cao áp thôi.
Mà câu hỏi trên có vẻ như bạn phải vạch ra kế hoạch thay vì làm thực. Nếu vậy thì đọc thêm sách về các kỹ thuật sinh hóa rồi quyết định cho mình thôi. Tôi tin nếu bạn chịu khó đọc lâu lâu một chút sẽ trở thành expert in the field ngay
cheer!
Nguyễn Ngọc Lương is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 08-01-05, 19:27   #6
Phạm Ngọc Dương
Registered Users
Thread starter
 
Phạm Ngọc Dương's Avatar
 
Tham gia ngày: Jan 2005
Đến từ: Vườn quốc gia Cát Tiên
Bài gửi: 128
Thanks: 0
Thanked 7 Times in 5 Posts
Drosophilia cảm ơn bạn dã góp ý ,bạn noi đúng câu hỏi trên của tôi chi là một tình huống mà tôi nghĩ ra thôi .thực sự enzyme không phải là một chuyên ngành học của tôi,nhưng khi tìm hiểu về enzym tôi cảm thay rất thích tôi thấy có nhiều điều thú vị trong đó .Và tôi thực sự muấn biêt về cái cách mà người ta thu được những chế phẩm enzyme tinh sạch từ những nguần cung cấp enzyme thưc vật hay từ nuôu cấy vi sinh vật.Để có được những chế phẩm enzyme chất lương cao dùng trong công nghiệp thực phẩm như protêase trong sản xuất nước mắm nhanh chẳng hạn.
vì thế ban nào biết gì về vấn đề này ,hay nhưng tài liệu có liên quan hãy giúp đỡ tôi nhé.Cảm ơn các bạn nhiều ! :P
Phạm Ngọc Dương is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 09-01-05, 11:02   #7
shortgun
Registered Users
 
shortgun's Avatar
 
Tham gia ngày: Aug 2004
Đến từ: Lao
Bài gửi: 86
Thanks: 0
Thanked 0 Times in 0 Posts
Trích:
đầu tiên tôi dùng dung dịch muối trung tính có PH=4,5 để tách hai enzym B và C
Cậu dùng pp kết tủa hay sắc ký trao đổi ion?

Trích:
sau đó tôi dùng sắc kí lọc gel để tách B ra khỏi C
Tách B ra khỏi C, D?

Trích:
Vấn đề là tôi vẫn chưa hình dung ra được bằng cách nào để gắn dặc hiệu Asp vào cột gel ,tôi chưa được thực hiện phương pháp này bao giờ
Đặt hàng thứ người ta đã làm sẵn. Nếu không có, co thể tham khảo các sách vở khác,
các methods của các article liên quan tới đề tài, tự xây dựng protocol.

Trích:
Và nếu thực hiện các phương pháp trên dể tách hỗn hợp enzym thi trong sản xuất người ta gắn kết các quá trình làm sao để quá trình tách thành một hệ thống
Để tối ưu hóa một công nghệ tinh sạch E, người ta có thể lấy nhiều thông số khác nhau làm cơ sở: hiệu suất thu hồi, họat tính E, vốn đầu tư, hiệu quả sử dụng dung môi ...
Thông số để gắn kết các công đọan là nhiệt độ, pH, họat lực ion, nồng độ họat chất ...

Trích:
nếu biết pI và khối lượng phân tử rồi thì chạy điện di 2 chiều là hợp lý nhất
không biết rõ về tinh sạch enzyme lắm nên tôi chỉ góp được có thế.
Xin hỏi enzyme tách chiết như trên thì còn gì hoạt tính nữa? Có lẽ cứ phải sắc ký ái lực, sắc ký lỏng cao áp thôi.
:?

Trích:
vì thế ban nào biết gì về vấn đề này ,hay nhưng tài liệu có liên quan hãy giúp đỡ tôi nhé.Cảm ơn các bạn nhiều
Cậu đọc thêm về biochemical separtion methods và downstream processing nha :|
shortgun is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 09-01-05, 12:01   #8
Phạm Ngọc Dương
Registered Users
Thread starter
 
Phạm Ngọc Dương's Avatar
 
Tham gia ngày: Jan 2005
Đến từ: Vườn quốc gia Cát Tiên
Bài gửi: 128
Thanks: 0
Thanked 7 Times in 5 Posts
Trích:
Nguyên văn bởi shortgun
Cậu dùng pp kết tủa hay sắc ký trao đổi ion?
Ý Của tớ là dùng dung dịch muối trung tính như (NH4)2SO4 để tách hỗn hợp ban đầu thành hai hỗn hợp nhỏ bằng cách kết tủa,bước này làm ở điều kiện nhiệt độ lạnh vì enzyme rât dễ bị biến tính.
hỗn hợp thứ nhất gồm hai enzyme B VÀ C
hỗn hợp thứ hai gồm A VÀ D
Sau đó tớ sẽ dùng các phương pháp sắc kí lọc gel để tảch rời B va C sắc kí ái lưc với dặc hiệu Asp để tách rời A VÀ D.
Tớ nghĩ dùng các biện pháp kết tủa tạm thời vẫn có thể dữ đươc hoạt tínhh enzyme chứ?
Shortgum những tài liệu cậu nói tớ có thể tìm thấy ở đâu vậy?
Cảm ơn cậu nhé!
Phạm Ngọc Dương is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 10-01-05, 20:28   #9
purin
Registered Users
 
purin's Avatar
 
Tham gia ngày: Aug 2004
Đến từ: Ho Chi Minh
Bài gửi: 14
Thanks: 0
Thanked 0 Times in 0 Posts
Send a message via Yahoo to purin
Tớ không biết rành lắm, nhưng có thể tách ênzym dựa trên trọng lượng phân tử. Có thể dùng sắc ký cột để phân tách dựa trên TLPT, sẽ thu được các phân đọan có ênzym cần thiết. Để biết có đúng không thì cậu chạy điện di SDS-PAGE. Tuy nhiên, đối với 2 ênzym có cùng TLPT nhưng pH khác nhau như C và D thì tớ không biết
purin is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 11-01-05, 03:55   #10
Cao Xuân Hiếu
Administrator
 
Cao Xuân Hiếu's Avatar
 
Tham gia ngày: Nov 2004
Đến từ: Gatersleben, Germany
Bài gửi: 1,551
Thanks: 113
Thanked 317 Times in 171 Posts
Send a message via Yahoo to Cao Xuân Hiếu
Hình như chúng ta đang "đánh trận trên giấy" rồi. Nếu đặt ra vấn đề như trên chỉ đúng với phân lập (tinh sạch) các protein thôi. Nếu muốn tinh sạch enzyme hoạt tính lại còn trên quy mô công nghiệp nữa thì chậc chậc ...
Theo tôi 1) trong một quy trình thì ng ta chỉ ưu tiên 1 loại enzyme thôi, cần 2) biến đổi một số đặc tính của enzyme để thuận tiện cho tinh sạch (thích nhất là tìm được nguồn enzyme chịu lạnh hoặc chịu nhiệt) ... Trong lĩnh vực này ng ta ko cố gắng giải các bài toán theo kiểu bài tập di truyền trong sách luyện thi đại học mà phải sáng tạo và tìm ra hướng cải thiện tình hình nhiều hơn. Ý tưởng là tiền mà.
Cao Xuân Hiếu is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Trả lời

Ðiều Chỉnh
Xếp Bài

Chuyển đến

Similar Threads
Ðề tài Người gửi Chuyên mục Trả lời Bài mới gởi
Tinh chế enzyme Lê Tiến Dũng Làm thí nghiệm với protein 2 23-04-10 10:41
Phương pháp tinh chế enzyme dạng lỏng sau khi lên men chìm Trương Huỳnh Anh Vũ Công nghệ Vi sinh 11 19-10-06 02:02
Hỏi về cách sử dụng enzyme giới hạn Trịnh Thành Trung Làm thí nghiệm với acid nucleic 17 26-09-06 16:57
Tủa enzyme bằng cồn hay muối Nguyễn Duy Hưng Làm thí nghiệm với protein 3 26-03-06 05:14


vB 3.8.7 Copyright © 2000 - 2014, Jelsoft Enterprises Ltd.