Hỏi về hiệu suất ligation

[ngaytho]

Các bác tiền bối ơi, em chót chọn AflII là một trong 2 enzym để digest vector và insert, song lại thấy phân đoạn được cắt bằng enzym này thường cho hiệu suất ligate không cao. Vậy em có nên dùng không hay là nên thay bằng enzym khác?
___________________________________

HÃY ĐAM MÊ VÀ BIẾN NIỀM ĐAM MÊ ẤY THÀNH SỰ THẬT !

Hãy lắng nghe tiếng nói của lòng đam mê,
hãy chắp đôi cánh cho tâm hồn bay bổng;
và hãy để bài hát nào cũng được hát lên....​

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Nếu bất khả kháng thì cứ làm thôi, và tăng thời gian ligation, dùng concentrated ligase, tối ưu insert vector ratio, và tăng lượng tế bào transformed trải lên dĩa (tóm lại là bằng mọi giá có được vài colony trên dĩa).
Nếu kích thước insert của bạn mà khá lớn thì chắc là phải đổi enzyme thôi vì nó sẽ làm cho việc cloning càng thêm khó khăn.
Có cái này về AflII ở neb: http://www.neb.com/nebecomm/products/faqproductR0520.asp
bạn có thể tham khảo cho thí nghiệm của mình.

 

[ngaytho]

Vector của em khoảng 5kb, insert là 1.1kb ạ.